Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ELISA και Dot ELISA

Η κύρια διαφορά μεταξύ ELISA και Dot ELISA είναι ότι το ELISA βοηθά στην ανίχνευση και τον ποσοτικό προσδιορισμό αντισωμάτων, ορμονών, πεπτιδίων ή άλλων πρωτεϊνών σε ένα βιολογικό δείγμα, ενώ, στο Dot-ELISA, το χρωμογόνο υπόστρωμα κατακρημνίζεται μόνο στην περιοχή της ενζυμικής δραστηριότητας. Επιπλέον, οι τρεις κύριοι τύποι ELISA είναι η άμεση ELISA, η έμμεση ELISA και η ανοσομετρική ή σάντουιτς ELISA ενώ η dot-ELISA είναι ένας τύπος ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας στερεάς φάσης, όπως και η κοινή ELISA.

Το ELISA και το dot-ELISA είναι δύο τύποι ανοσολογικών εργαλείων που χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση και την ποσοτικοποίηση της ποσότητας των πρωτεϊνών, ιδίως των αντιγόνων. Είναι πιο γρήγορες, ευέλικτες, αναπαραγώγιμες, υψηλής ευαισθησίας και δοκιμές υψηλής απόδοσης.

Βασικές περιοχές που καλύπτονται

1. Τι είναι το ELISA
     – Ορισμός, Τύποι, Σημασία
2. Τι είναι το Dot ELISA
     – Ορισμός, Μέθοδος, Σημασία
3. Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ ELISA και Dot ELISA
     – Περίληψη κοινών χαρακτηριστικών
4. Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ELISA και Dot ELISA
     – Σύγκριση βασικών διαφορών

Βασικοί όροι

Άμεση ELISA, Dot ELISA, ELISA, Ανοσολογικές Αναλύσεις, Έμμεση ELISA, ELISA σάντουιτς

Τι είναι το ELISA

ELISA (ανοσοροφητικός προσδιορισμός συνδεδεμένος με ένζυμα ) είναι ένας τύπος ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας στερεάς φάσης που είναι υπεύθυνος για την ανίχνευση συγκεκριμένων πρωτεϊνών σε βιολογικά δείγματα με τη βοήθεια πρωτογενών αντισωμάτων. Σε αυτή τη δοκιμή, μια ενζυματική αντίδραση βοηθά στην ανίχνευση των δεσμευμένων πρωτογενών αντισωμάτων. Εδώ, το ένζυμο χρησιμοποιεί ένα χρωμογόνο υπόστρωμα για να αναπτύξει ένα χρώμα. Επιπλέον, η στερεά φάση που χρησιμοποιείται από την ELISA είναι κυρίως μια πλάκα μικροτιτλοδότησης.

Εικόνα 1:Πλάκα μικροτίτλου

Επιπλέον, υπάρχουν τρεις κύριοι τύποι ELISA με βάση τη μεθοδολογία.

Άμεση ELISA

Στην άμεση ELISA, η επικάλυψη της επιφάνειας μιας πλάκας με το δείγμα επιτρέπει στα συνδεδεμένα με ένζυμα αντισώματα να συνδεθούν με τη συγκεκριμένη πρωτεΐνη στην πλάκα. Στη συνέχεια, η προσθήκη του χρωμογόνου υποστρώματος βοηθά στην ανίχνευση των δεσμευμένων σε πρωτεΐνες αντισωμάτων.

Εικόνα 2:Άμεση ELISA

Έμμεση ELISA

Η έμμεση ELISA περιλαμβάνει την ανίχνευση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης σε ένα δείγμα με μια διαδικασία δέσμευσης δύο σταδίων. Εδώ, το πρώτο βήμα είναι η επικάλυψη μιας πλάκας με το δείγμα και η επώασή της με έναν συγκεκριμένο τύπο πρωτογενούς αντισώματος. Στη συνέχεια, το επόμενο βήμα είναι η επώαση αυτής της πλάκας με ένα δευτερεύον αντίσωμα, το οποίο συνδέεται με το πρωτεύον αντίσωμα. Επιπλέον, αυτό το δευτερεύον αντίσωμα συνδέεται με ένα ένζυμο. Επομένως, η προσθήκη του χρωμογόνου υποστρώματος βοηθά στην ανίχνευση της συγκεκριμένης πρωτεΐνης στο πιάτο χρησιμοποιώντας την ανάπτυξη χρώματος.

Ανοσομετρική/ELISA σάντουιτς

Στην ELISA σάντουιτς, το πρώτο βήμα είναι να τοποθετήσετε τη συγκεκριμένη πρωτεΐνη που θα ανιχνευθεί από το δείγμα μεταξύ του πρωτογενούς και του δευτερογενούς αντισώματος. Εδώ, η πρώτη διαδικασία είναι η επικάλυψη της πλάκας με το πρωτεύον αντίσωμα, αλλά όχι με το δείγμα. Στη συνέχεια, η επόμενη διαδικασία είναι η επώαση του δείγματος με αυτή την πλάκα. Μετά από αυτό, η συγκεκριμένη πρωτεΐνη που είναι δεσμευμένη στο πρωτεύον αντίσωμα μπορεί να ανιχνευθεί με τη βοήθεια ενός δευτερεύοντος αντισώματος.

Τι είναι το Dot ELISA

Το Dot-ELISA είναι ένας τύπος ανοσοπροσδιορισμού ενζύμων στερεάς φάσης. Το πιο σημαντικό χαρακτηριστικό του dot-ELISA είναι η καθίζηση του χρωμογόνου υποστρώματος μόνο στην περιοχή με την ενζυματική δραστηριότητα. Εδώ, η στερεά φάση είναι μια μεμβράνη νιτροκυτταρίνης, η οποία επιτρέπει τη σύνδεση των πρωτεϊνών στην επιφάνεια. Μετά την επώαση του δείγματος με τη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης, η περίσσεια του δείγματος ξεπλένεται και η μη δεσμευμένη επιφάνεια της μεμβράνης νιτροκυτταρίνης φράσσεται.

Εικόνα 3:ELISA κουκκίδας

Στη συνέχεια, το πρωτεύον αντίσωμα προστίθεται στη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Τέλος, η προσθήκη ενός δευτερογενούς αντισώματος που συνδέεται με ένα ένζυμο βοηθά στην ανίχνευση των δευτερογενών αντισωμάτων που συνδέονται με την πρωτεΐνη. Έτσι, αυτό επιτρέπει στο σύμπλεγμα πρωτεΐνης-αντισώματος να εμφανίζεται ως καθαρή κουκκίδα στη μεμβράνη νιτροκυτταρίνης.

Ποιες είναι οι ομοιότητες μεταξύ ELISA και Dot ELISA

• Το ELISA και το dot ELISA είναι δύο τύποι ανοσολογικών αναλύσεων που χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση και τον ποσοτικό προσδιορισμό πρωτεϊνών σε βιολογικά δείγματα.
• Είναι ενζυμικές ανοσοδοκιμασίες στερεάς φάσης (EIA).
• Επίσης, και οι δύο μέθοδοι χρησιμοποιούν ένζυμα όπως η αλκαλική φωσφατάση (AP) και η υπεροξειδάση χρένου (HRP) που συνδέονται με το δευτερογενές αντίσωμα. Με την προσθήκη του κατάλληλου χρωμογόνου υποστρώματος, το οποίο αναπτύσσει χρώμα μέσω της ενζυματικής δράσης, μπορεί να ανιχνευθεί η συγκεκριμένη πρωτεΐνη στο δείγμα.
• Εξάλλου, και οι δύο μέθοδοι είναι υψηλής ευαισθησίας και υψηλής απόδοσης. Επίσης, είναι πιο γρήγορα και αναπαραγώγιμα επίσης.

Ποια είναι η διαφορά μεταξύ ELISA και Dot ELISA

Ορισμός

Το ELISA (ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία) αναφέρεται σε μια ταχεία ανοσοχημική δοκιμή που περιλαμβάνει ένα ένζυμο που χρησιμοποιείται για τη μέτρηση μιας μεγάλης ποικιλίας δοκιμών σωματικών υγρών, ενώ το dot ELISA αναφέρεται σε ένα στερεό ανοσοδοκιμασία φάσης που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση είτε αντιγόνου είτε αντισώματος. Επομένως, αυτή είναι η κύρια διαφορά μεταξύ ELISA και ELISA κουκκίδων.

Τύποι

Οι τρεις τύποι ELISA είναι η άμεση ELISA, η έμμεση ELISA και η ELISA σάντουιτς, ενώ η ELISA με τελείες είναι ένας τύπος ELISA σάντουιτς.

Μέθοδος

Το ELISA περιλαμβάνει την ανίχνευση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης με τη βοήθεια ενός αντισώματος και την ανίχνευση δεσμευμένων αντισωμάτων μέσω μιας ενζυματικής αντίδρασης, ενώ στην κουκκίδα ELISA, το χρωμογόνο υπόστρωμα συνδέεται μόνο στην περιοχή με ενζυματική δραστηριότητα. Επομένως, αυτή είναι μια άλλη διαφορά μεταξύ ELISA και ELISA κουκκίδων.

Στερεά φάση

Μια ακόμη διαφορά μεταξύ της ELISA και της ELISA κουκκίδων είναι ότι η ELISA χρησιμοποιεί κυρίως πλάκες μικροτιτλοδότησης ως στερεά φάση ενώ το dot-ELISA χρησιμοποιεί μεμβράνες νιτροκυτταρίνης ως στερεά φάση.

Συμπέρασμα

Το ELISA είναι ένας τύπος ανοσολογικού προσδιορισμού που περιλαμβάνει την ανίχνευση μιας συγκεκριμένης πρωτεΐνης σε ένα βιολογικό δείγμα με τη βοήθεια ενός αντισώματος. Εδώ, μια ανάπτυξη χρώματος μέσω μιας ενζυματικής αντίδρασης εμπλέκεται στην ανίχνευση των δεσμευμένων αντισωμάτων στην πρωτεΐνη. Επιπλέον, το dot ELISA είναι ένας τύπος ELISA σάντουιτς. Εδώ, το χρωμογόνο υπόστρωμα κατακρημνίζεται στις περιοχές με ενζυματική δραστηριότητα. Επομένως, η κύρια διαφορά μεταξύ ELISA και κουκκίδας ELISA είναι η μέθοδος ανίχνευσης.

Αναφορά:

1. "TechNote:Ποιες είναι οι διαφορές μεταξύ των τύπων ανάλυσης ELISA;" Enzo Life Sciences, 27 Ιουλίου 2018, Διαθέσιμο εδώ
2. Ζ, Σβομπόντοβα. «Δοκιμή συγγένειας Dot-ELISA:Μια εύκολη, χαμηλού κόστους μέθοδος για την εκτίμηση της δεσμευτικής δραστηριότητας των μονοκλωνικών αντισωμάτων». Journal of Analytical &Bioanalytical Techniques, τομ. 04, αρ. 03, 2013, doi:10.4172/2155-9872.1000168.

Εικόνα Ευγενική προσφορά:

1. «Πλάκα μικροτίτλου» του Jeffrey M. Vinocur – Δικό έργο (CC BY 2.5) μέσω Commons Wikimedia  
2. «Διάγραμμα ELISA» του Cavitri – Δική μου εργασία (CC BY 3.0) μέσω Commons Wikimedia  
3. "Dot-Elisa" By MrPotatoDeluxe – Δική δουλειά (CC BY-SA 3.0) μέσω Commons Wikimedia